Mestrado em Tecnologias Aplicadas a Animais de Interesse Regional
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Item AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ANTIFÚNGICO, MODULADOR E ATIVIDADE ANTIBIOFILME DO D-LIMONENO FRENTE ÀS LINHAGENS DE Candida nivariensis(2023) SOUSA, Cecilia AndradeO gênero Candida é responsável por causar infecções fúngicas, conhecidas como candidíases, em homens e animais. Contudo, poucos antifúngicos estão disponíveis para tratar esse tipo de infecção. Além disso, a resistência apresentada por estes microrganismos e o desafio de encontrar novos antifúngicos tem dificultado o tratamento dessas enfermidades. Por isso, há uma necessidade crescente de encontrar novos compostos que possuam tal potencial. O D-limoneno é um monoterpeno considerado o principal elemento do óleo essencial de frutas cítricas que possui efeitos terapêuticos como antiparasitário, antioxidantes, vasodilatador, entre outros, no entanto pouco se sabe sobre sua ação antimicótica. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o potencial antifúngico, modulador e atividade antibiofilme do D-limoneno, sobre cepas de Candida nivariensis. Para tanto, o estudo da atividade antifúngica in vitro do D-limoneno foi realizado através dos seguintes testes: Concentração inibitória mínima (CIM), Concentração fungicida mínima (CFM), avaliação do potencial modulatório do D-limoneno em associação com antifúngicos de uso clínico e inibição da formação de biofilme. Para todos os ensaios foram utilizadas quatro cepas de C. nivariensis isoladas de peixes da espécie tambatinga (Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus), denominadas P1, P2, P3 e P4. A CIM foi determinada pela técnica de microdiluição em caldo e a relação CFM/CIM foi obtida para especificar a natureza da ação antimicrobiana. A ação modulatória foi avaliada nas concentrações de 1/4 e 1/8 da CIM do D-limoneno, em associação com os antifúngicos Anfotericina B e fluconazol. Para os ensaios de modulação também foram avaliados parâmetros de susceptibilidade com os antifúngicos Anfotericina B e Fluconazol. A atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total, através da coloração com cristal violeta. Os resultados de CIM, CFM e de modulação foram expressos como a moda de pelo menos três repetições independentes. Para o ensaio de biofilme os dados foram submetidos à ANOVA e teste post-hoc de Bonferroni, com um nível de significância de 5% (p<0,05). Nos ensaios de sensibilidade aos antifúngicos as cepas de C. nivariensis foram resistentes ao fluconazol (CIM ≥ 64 μg/mL) e sensíveis a Anfotericina B (CIM ≤ 1 μg/mL). Verificou-se que o D-limoneno apresentou atividade inibitória sobre as células planctônicas de Candida nivariensis, apresentando CIM que variaram de 16 µg/mL a 32 µg/mL. A atividade antifúngica do D-limoneno foi considerada fungicida (CFM = 32 μg/mL), após avaliação da razão CFM/CIM para todas as cepas estudadas. A combinação entre ¼ da CIM de D-Limoneno e fluconazol proporcionou efeitos sinérgicos frente às cepas P1, P2 e P3 (FIC i ≤0,5), aditivo em P1 para a combinação com ⅛ da CIM de D-limoneno e antagônico para as demais combinações com esta droga. A associação do D-Limoneno com anfotericina B gerou efeitos antagônicos para a maioria das combinações, com exceção da cepa P2 que foi constatado efeito aditivo na modulação de ¼ da CIM D-limoneno com esta droga. O D-limoneno, apresentou atividade antibiofilme frente às cepas de C. nivariensis. Os resultados deste estudo mostram que este monoterpeno apresenta-se como uma substância promissora para o desenvolvimento de novos produtos com atividade antifúngica contra infecções causadas por estas espécies. Entretanto, novas investigações são necessárias para avaliar o efeito da combinação deste terpeno com outros antifúngicos e sobre novas espécies de fungos multirresistentes para ratificar o efeito sinérgico e seus respectivos mecanismos de ação. Abstract The genus Candida is responsible for causing fungal infections known as candidiasis in humans and animals. However, few antifungals are available to treat this type of infection. In addition, the resistance presented by these microorganisms and the challenge of finding new antifungals have made it difficult to treat these diseases. Therefore, there is a growing need to find new compounds that possess such potential. Limonene is a monoterpene considered the main element of the essential oil of citrus fruits that has therapeutic effects such as antiparasitic, antioxidant, vasodilator, among others; however little is known about its antimycotic action. The aim of this study was to evaluate in vitro the antifungal, modulating and antibiotic potential of D-limonene, on strains of Candida nivariensis. To this end, the study of the in vitro antifungal activity of D-limonene was performed through the following tests: Minimum inhibitory concentration (MIC), Minimum fungicidal concentration (MFC), evaluation of the modulatory potential of D-limonene in association with clinically used antifungals and inhibition of biofilm formation. For all assays, four strains of C. nivariensis isolated from fish of the tambatinga species (Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus) were used, named P1, P2, P3, and P4. The MIC was determined by the broth microdilution technique and the MFC/MIC ratio was obtained to specify the nature of the antimicrobial action. The modulatory action was evaluated at concentrations of 1/4 and 1/8 of the MIC of D-limonene, in association with the antifungals Amphotericin B and fluconazole. For the modulation assays, susceptibility parameters were also evaluated with the antifungal drugs Amphotericin B and Fluconazole. The antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass through crystal violet staining. The MIC, MFC and modulation results were expressed as the mode of at least three independent replicates. For the biofilm assay, data were subjected to ANOVA and Bonferroni post-hoc test, with a significance level of 5% (p<0.05). In antifungal sensitivity assays, C. nivariensis strains were resistant to fluconazole (MIC ≥ 64 μg/mL) and sensitive to Amphotericin B (MIC ≤ 1 μg/mL). D-limonene was found to exhibit inhibitory activity on C. nivariensis planktonic cells, showing MICs ranging from 16 µg/mL to 32 µg/mL. The antifungal activity of D-limonene was considered fungicidal (MFC = 32 μg/mL), after evaluation of the MFC/MIC ratio for all strains studied. The combination between ¼ MIC of D-limonene and fluconazole provided synergistic effects against the strains P1, P2 and P3 (FIC i ≤0.5), additive in P1 for the combination with ⅛ MIC of D-limonene and antagonistic for the other combinations with this drug. The association of D-limonene with amphotericin B generated antagonistic effects for most combinations, with the exception of strain P2 that was found to have an additive effect in modulating ¼ of the D-limonene MIC with this drug. The D-limonene, showed antibiofilm activity against strains of C. nivariensis. The results of this study show that this monoterpene presents itself as a promising source for the development of new products with antifungal activity against infections caused by these species. However, further investigations are necessary to evaluate the effect of the combination of this terpene with other antifungal agents and on new species of multi-resistant fungi to ratify the synergistic effect and their respective mechanisms of action.Item ANÁLISE COMPARATIVA DA EXPRESSÃO GÊNICA DE MARCADORES DE DIFERENCIAÇÃO MESENQUIMAL EM LINHAGENS DE CÉLULAS SINALIZADORAS MEDICINAIS ISOLADAS DA MEDULA ÓSSEA E TECIDO ADIPOSO SUBCUTÂNEO MURINO(2023-12-13) NASCIMENTO, Ana Gabriellen Sousa doRESUMO A evolução da compreensão sobre a origem e identidade de células sinalizadoras medicinais (MSC) tem levado a uma nova perspectiva sobre suas funções e aplicações terapêuticas. A relação entre as diferentes subpopulações/linhagem de MSCs, sua capacidade de diferenciação in vitro, seu imunofenótipo e, subsequentemente, sua expressão gênica ainda são pouco conhecidos, permanecendo relevantes incertezas sobre a real plasticidade das MSCs e o seu potencial terapêutico. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo comparar a expressão gênica de alguns genes relacionados à diferenciação osteogênica, condrogênica e adipogênica antes e após a indução de diferenciação in vitro, em MSCs oriundas da medula óssea (BMMSC) e tecido adiposo (ADSC) subcutâneo murino. Para isto, as células foram coletadas, isoladas e cultivadas até a terceira passagem sob condições controladas de CO2 e temperatura. Foram realizados ensaios de prolificidade por Scratch Wound Healing, imunofenotipagem para os anticorpos CD90, CD45, CD105 e CD14, ensaio de plasticidade através da indução à diferenciação in vitro e análise de expressão gênica por técnica de qPCR para os genes: OTP, IBS, BMP2 e OTX para linhagem osteogênica; LPL e ADIPOQ para linhagem adipogênica; COLL II e AGGRECAN para linhagem condrogênica. Sob as condições experimentais do presente estudo, o tecido de origem de coleta exerceu efeito sobre a expressão da maior parte dos marcadores de diferenciação mesenquimal. As BMMSCs indiferenciadas apresentaram maior expressão in vitro dos genes associados às linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica, mas não se evidenciou expressão gênica típica de osteoblastos e adipócitos em BMMSCs diferenciadas. A expressão gênica relacionada a condrogênese foi considerada inconclusiva, não sendo possível afirmar, com segurança, se houve ou não diferenciação verdadeira. A expressão tanto de marcadores considerados fatores de transcrição ou de crescimento indutores de diferenciação, denotam o provável potencial modulador in vitro de BMMSCs e ADSCs para as diferenciações mesenquimais estudadas. ABSTRACT The evolution of understanding about the origin and identity of medicinal signaling cells (MSC) has led to a new perspective on their functions and therapeutic applications. The relationship between the different subpopulations/lineages of MSCs, their ability to differentiate in vitro, their immunophenotype and, subsequently, their gene expression are still poorly understood, with relevant uncertainties about the real plasticity of MSCs and their therapeutic potential. Thus, the present work aims to compare the gene expression of some genes related to osteogenic, chondrogenic and adipogenic differentiation before and after in vitro induction of differentiation in MSCs originating from bone marrow (BMMSC) and subcutaneous adipose tissue (ADSC) murine. For this, cells were collected, isolated and cultured until the third passage under controlled conditions of CO2 and temperature. Prolificity assays were carried out by Scratch Wound Healing, immunophenotyping for CD90, CD45, CD105 and CD14 antibodies, plasticity assay through in vitro differentiation induction and gene expression analysis by qPCR technique for the genes: OTP, IBS, BMP2 and OTX for osteogenic lineage; LPL and ADIPOQ for adipogenic lineage; COLL II and ACCAN for chondrogenic lineage. Under the experimental conditions of the present study, the tissue from which the sample was collected had an effect on the expression of most mesenchymal differentiation markers. Undifferentiated BMMSCs showed higher in vitro expression of genes associated with osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages, but there was no evidence of gene expression typical of osteoblasts and adipocytes in differentiated BMMSCs. Gene expression related to chondrogenesis was considered inconclusive, and it is not possible to state with certainty whether or not there was true differentiation. The expression of both markers considered transcription or growth factors that induce differentiation, denote the probable in vitro modulating potential of BMMSCs and ADSCs for the mesenchymal differentiations studied.Item PRESENÇA DE TRIPANOSSOMATÍDEOS EM MORCEGOS DE MUNICÍPIOS DA REGIÃO NORDESTE DO BRASIL(2023-11-22) OLIVEIRA, Hyan Henrique AlmeidaRESUMO A relação entre morcegos e tripanossomatídeos é de natureza complexa e variável, dependendo das espécies de morcegos, e dos parasitos envolvidos, abrigando-os em seus organismos sem sofrerem consequências negativas. Além disso, desempenham um papel crucial na disseminação desses parasitos em populações de vetores e outros hospedeiros. O objetivo desse estudo, foi investigar a presença de tripanossomatídeos em morcegos nos Estados do Piauí e Maranhão. Para a captura dos animais, foram utilizadas redes de neblinas (mist nets), em seguida, os animais foram removidos das redes e cuidadosamente alocados individualmente em sacos de pano devidamente numerados, com propósito subsequente de coletar amostras sanguíneas. Essas coletas foram realizadas em quatro localidades distintas: Teresina, Altos, Floriano e Povoado Campo Grande no município de Timon, no estado do Maranhão. As amostras foram mantidas a -20 °C para subsequentes análises moleculares. Para as análises moleculares, foram empregados os iniciadores (Primes) S4 e S1, que amplificaram um fragmento de 520pb do DNA alvo. Posteriormente, esse fragmento de 520pb foi utilizado como molde para uma segunda amplificação (Nested PCR) com os Primers S17 e S1, amplificando um fragmento menor de 480pb. Ao total, foram capturados 46 morcegos, pertencentes a 09 espécies diferentes de morcegos. Em todas às áreas amostradas, foi constatada a presença de infecção para tripanossomatídeos. Dos morcegos analisados, 25 morcegos testaram positivos para diferentes tipos de tripanossomatídeos, embora os tipos específicos ainda necessitem de uma investigação mais aprofundada. Vale ressaltar que todos os morcegos analisados testaram negativo para Leishmania spp. Esse resultado foi obtido por meio de análise molecular utilizando PCR convencional utilizando DNA do parasito. Os resultados indicaram um nível mais elevado de infecção no município de Floriano, em comparação com a Floresta Nacional dos Palmares, por representar um ambiente silvestre. A presença de tripanossomatídeos em morcegos pode ter implicações significativas na ecologia desses animais, mas ainda há muito a ser compreendido sobre o papel dos morcegos na preservação dos ecossistemas relacionados a esses parasitos. Portanto, os resultados sugerem que os morcegos não devem ser descartados como possíveis portadores de tripanossomatídeos, e sua participação nos ciclos enzoóticos é relevante para futuras investigações e estudos. ABSTRACT The relationship between bats and trypanosomatids is of a complex and variable nature, depending on the species of bats, and the parasites involved, harboring them in their bodies without suffering negative consequences. Furthermore, they play a crucial role in the propagation of these parasites in populations of vectors and other hosts. The aim of this study was to investigate the presence of trypanosomatids in bats in the states of Piauí and Maranhão. To capture the animals, mist nets were used, then the animals were removed from the nets and carefully placed individually in duly numbered cloth bags, with the subsequent purpose of collecting blood samples. These collections were carried out in four different locations: Teresina, Altos, Floriano and Povoado Campo Grande in the municipality of Timon, in the state of Maranhão. Samples were kept at -20°C for subsequent molecular analyses. For the molecular analyses, primers (Primes) S4 and S1 were used, which amplified a 520pb fragment of the target DNA. Subsequently, this 520pb fragment was used as a template for a second amplification (Nested PCR) with Primers S17 and S1, amplifying a smaller fragment of 480pb. In total, 46 bats were captured, belonging to 09 different species of bats. In all areas sampled, the presence of trypanosomatid infection was found. Of the bats studied, 25 bats tested positive for different types of trypanosomatids, although the specific types are still in need of further investigation. It is noteworthy that all analyzed bats tested negative for Leishmania spp. This result was obtained through molecular analysis using conventional PCR using parasite DNA. The results indicated a higher level of infection in the municipality of Floriano, compared to the Floresta Nacional dos Palmares, as it represents a wild environment. The presence of trypanosomatids in bats may have significant implications for the ecology of these animals, but there is still much to be understood about the role of bats in preserving ecosystems related to these parasites. Therefore, the results suggest that bats should not be discarded as possible carriers of trypanosomatids, and their participation in enzootic cycles is relevant for future investigations and studies.Item CITOGENÉTICA E VIABILIDADE DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS ADIPODERIVADAS DE RATOS EM CULTIVO COM HIDROGEL DE GELATINA METACRILATA (GELMA)(2023-06-19) SOARES, Letícya Lorrayne da SilvaRESUMO A associação de células-tronco mesenquimais (MSC) com biomateriais vem sendo investigada, com o objetivo de reduzir o tempo e melhorar a qualidade cicatricial de diversos tecidos do organismo. A regeneração óssea representa um importante desafio na ortopedia, ortodontia e traumatologia, humana e veterinária. A terapia com células-tronco mesenquimais vem complementar a utilização dos biomateriais, com a sua propriedade de osteogênese, transformando um biomaterial primariamente osteoindutor em um substituto ósseo completo, comparável a enxertia óssea autógena, porém sem as morbidades dessa cirurgia. Entretanto, é necessário avaliar a biocompatibilidade e os possíveis efeitos tóxicos da associação dessas células com os biomatreiais, sendo imprescindíveis testes in vitro, pois são muitos os fatores que podem causar danos no DNA. Dessa forma, este estudo tem como objetivo avaliar a cito e genotoxicidade, e a biocompatibilidade do Hidrogel de gelatina metacrilata (GelMA) a 1% e 3% associado a cultura de células-tronco mesenquimais adipoderivadas (ADSC), mediante teste citogenético por Ensaio Cometa e viabilidade celular por MTT, além de analisar o potencial osteogênico desse biomaterial. As ADSCs foram isoladas de tecido adiposo de rato (Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFPI-658/20) por digestão enzimática utilizando colagenase I e mantidas em cultivo em meio DMEM enriquecido com PBS (15%), incubadas a 37oC, 5% CO2. As ADSCs foram caracterizadas por citometria de fluxo, apresentando marcação positiva para CD90 e CD105, e negativa para CD14 e CD45. A plasticidade dessas células foi comprovada por meio da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O GelMA foi preparado dissolvendo-se 0,1g em 5mL de PBS, usando Igarcure 2959 como fotoiniciador a 40oC, agitado mecanicamente e reticulado em luz UV para formação do hidrogel. O material foi caracterizado por FTIR, DRX, TG/DTG e MEV. O teste letalidade por Artemia salina foi realizado em quatro concentrações diferentes (5mg/mL; 1mg/mL; 0,5mg/mL e 0,1mg/mL) em 24h e 48h, apresentando leve toxicidade do GelMA na sua maior concentração (5mg/mL), porém, ainda acima da DL50 (dose letal média). No teste de MTT apenas o GelMA1% apresentou viabilidade celular acima de 70% em todos os tempos estudados, não apresentando potencial citototóxico para as ADSCs. No ensaio cometa o hidrogel de GelMA a 1% e 3% não demonstrou potencial genotóxico as ADSCs, não induzindo danos estatisticamente significativos no DNA dessas células. Na indução osteogênica das ADSCs com o GelMA 1% e 3%, verificou-se que o biomaterial não é capaz de promover a diferenciação celular na ausência de um fator indutor. Conclui-se que a associação do hidrogel de GelMA com ADSCs é promissora, pois é capaz de interagir positivamente e facilita a adesão celular. Biocompatível, não apresentando cito e genotoxicidade às células, permitindo futuros estudos in vivo. ABSTRACT The association of mesenchymal stem cells (MSC) with biomaterials has been investigated, with the aim of reducing time and improving the healing quality of various body tissues Bone regeneration still represents a challenge in orthopedics, orthodontics and traumatology. Therapy with mesenchymal stem cells complements the use of biomaterials, with their osteogenesis property, transforming a primarily osteoinductive biomaterial into a complete bone substitute, comparable to autogenous bone grafting, but without the morbidities of this surgery. However, it is necessary to evaluate the biocompatibility and the possible toxic effects of the association of these cells with the biomaterials, being essential in vitro tests, since there are many factors that can cause DNA damage. Thus, this study aims to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity, and the biocompatibility of the 1% and 3% methacrylate gelatin hydrogel (GelMA) associated with the culture of adipoderivative mesenchymal stem cells (ADSC), through cytogenetic test by Comet Assay and cell viability by MTT, in addition to analyzing the osteogenic potential of this biomaterial. The ADSCs were isolated from rat adipose tissue (Commission for Ethics in Animal Use - CEUA/UFPI-658/20) by enzymatic digestion using collagenase I and maintained in culture in DMEM medium enriched with PBS (15%), incubated at 37oC , 5% CO2. ADSCs were characterized by flow cytometry, showing positive staining for CD90 and CD105, and negative for CD14 and CD45. The plasticity of these cells was proven through adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation. GelMA was prepared by dissolving 0.1g in 5mL of PBS, using Igarcure 2959 as a photoinitiator at 40oC, mechanically stirred and cross-linked under UV light to form the hydrogel. The material was characterized by FTIR, XRD, TG/DTG and SEM. The lethality test for Artemia salina was performed at four different concentrations (5mg/mL; 1mg/mL; 0.5mg/mL and 0.1mg/mL) in 24h and 48h, showing mild toxicity of GelMA at its highest concentration (5mg/mL). mL), however, still above the LD50 (mean lethal dose). In the MTT test, only GelMA1% showed cell viability above 70% at all times studied, not showing cytotoxic potential for ADSCs. In the comet assay, the 1% and 3% GelMA hydrogel did not demonstrate genotoxic potential for ADSCs, not inducing statistically significant damage to the DNA of these cells. In the osteogenic induction of ADSCs with GelMA 1% and 3%, it was verified that the biomaterial is not able to promote cell differentiation in the absence of an inducing factor. It is concluded that the association of GelMA hydrogel with ADSCs is promising, as it is capable of positively interacting and facilitates cell adhesion. Biocompatible, not showing cytotoxicity and genotoxicity to cells, allowing future in vivo studies.Item CITOTOXICIDADE E GENOTOXICIDADE DA LAPONITA EM CULTURAS DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS(2023-06-19) CARDOSO, Francisca Louenny AlvesRESUMO As Células-tronco mesenquimais são células indiferenciadas, que constituem ferramenta promissora no campo da medicina regenerativa, pois possuem capacidade de multiplicação mantendo seu estado indiferenciado, além da renovação de diversos tecidos, por meio de sua diferenciação celular. A laponita é uma nanoargila sintética, utilizada em diversas aplicações industriais e possui características que possibilitam sua utilização na engenharia de tecidos. Recentemente, foram publicados estudos que comprovam a capacidade da laponita em induzir a diferenciação osteogênica de células-tronco mesenquimais in vitro, o que a torna um material apropriado para a engenharia de tecidos ósseos. No entanto, pouco se sabe quanto as reações imunológicas desencadeadas por potenciais citotóxicos e genotóxicos que essa interação pode proporcionar. Assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a toxicidade em nível celular e genômico, da integração da laponita em culturas de células-tronco adipoderivadas de ratos, sob autorização da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA) da UFPI, n. 665/21. A caracterização físico-química da Laponita® foi realizada por espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier, análise termogravimétrica, difração de raios X, e micrografias foram realizadas em microscópio eletrônico de varredura. O material também passou por uma triagem citotóxica por meio do ensaio de letalidade Artemia salina. O tecido adiposo foi coletado e as células foram cultivadas a 5% de CO2 a 37°C. Para caracterização celular foram realizados os testes de morfologia e UFC, além da imunofenotipagem por citometria de fluxo, para os anticorpos CD14, CD45, CD90 e CD105. Ainda, o ensaio de plasticidade celular, mediante indução para diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, além da avaliação do potencial de diferenciação osteogênica da Laponita® presente no meio. As células foram cultivadas com a Laponita® em concentrações de 3% e 6% em três tempos distintos para análise de citotoxicidade por MTT. A análise de genotoxicidade foi conduzida por meio do ensaio cometa para avaliar danos e reparos no DNA em células individuais. Na caracterização do material obteve-se resultados semelhantes aos encontrados na literatura, quando se evidencia a estrutura química cristalina e organizada. Nas análises termogravimétricas, a temperatura de degradação mostrou-se em conformidade com dados observados em outros estudos. No relativo à toxicidade, a laponita obteve resultados abaixo da CL50. As células-tronco mesenquimais mostraram-se com morfologia fibroblastóide, e apresentaram os anticorpos CD14-, CD45-, CD90+ e CD105+. Demonstraram capacidade de diferenciar-se em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. Em culturas contendo a laponita, a diferenciação foi possivelmente potencializada. Quanto à citotoxicidade, o material apresentou baixos resultados e houve aumento da viabilidade celular em todos os tempos analisados. A genotoxicidade entre a interação da célula com a Laponita® não demonstrou diferenças estatisticamente significativas entre o índice de dano e os grupos experimentais, porém, quanto a frequência de dano, a Laponita® 6% difere quando comparada Laponita® 3% em maior tempo de exposição. Com base neste estudo, conclui-se que a Laponita® representa um biomaterial potencialmente útil para a terapia celular. ABSTRACT Mesenchymal stem cells are undifferentiated cells, which are a promising tool in the field of regenerative medicine, as they have the ability to multiply while maintaining their undifferentiated state, in addition to renewing various tissues through their cell differentiation. Laponite is a synthetic nanoclay, used in several industrial applications and has characteristics that allow its use in tissue engineering. Recently, studies have been published that prove the ability of laponite to induce osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells in vitro, which makes it an appropriate material for bone tissue engineering. However, little is known about the immunological reactions triggered by cytotoxic and genotoxic potentials that this interaction can provide. Thus, this work was carried out with the objective of evaluating the toxicity, at cellular and genomic level, of the integration of laponite in cultures of adipoderivative stem cells of rats, under authorization of the Ethics Commission in the Use of Animals (CEUA) of the UFPI, n . 665/21. The physical-chemical characterization of Laponita® was performed by Fourier transform infrared spectroscopy, thermogravimetric analysis, X-ray diffraction, and micrographs were performed in a scanning electron microscope. The material also underwent cytotoxic screening using the Artemia salina lethality assay. Adipose tissue was harvested and cells were cultured at 5% CO2 at 37°C. For cell characterization, morphology and CFU tests were performed, in addition to immunophenotyping by flow cytometry, for antibodies CD14, CD45, CD90 and CD105. Still, the cellular plasticity test, through induction for osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation, in addition to the evaluation of the osteogenic differentiation potential of Laponita® present in the medium. Cells were cultured with Laponita® at concentrations of 3% and 6% at three different times for analysis of cytotoxicity by MTT. Genotoxicity analysis was conducted using the comet assay to assess DNA damage and repair in individual cells. In the characterization of the material, results similar to those found in the literature were obtained, when the crystalline and organized chemical structure is evidenced. In thermogravimetric analyses, the degradation temperature was in accordance with data observed in other studies. Regarding toxicity, laponite obtained results below the LC50. Mesenchymal stem cells showed fibroblastoid morphology, and presented CD14-, CD45-, CD90+ and CD105+ antibodies. They demonstrated the ability to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. In cultures containing laponite, differentiation was possibly enhanced. As for cytotoxicity, the material showed low results and there was an increase in cell viability at all times analyzed. The genotoxicity between the interaction of the cell with Laponita® did not show statistically significant differences between the damage index and the experimental groups, however, regarding the frequency of damage, Laponita® 6% differs when compared to Laponita® 3% in greater time of exhibition. Based on this study, it is concluded that Laponita® represents a potentially useful biomaterial for cell therapy.Item DESCRIÇÃO DAS ALTERAÇÕES OFTALMOLÓGICAS EM CÃES COM LEISHMANIOSE VISCERAL SUBMETIDOS AO TRATAMENTO COM ALOPURINOL A LONGO PRAZO ASSOCIADOS COM DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO PELA REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE E SWAB CONJUNTIVAL(2023-05-30) CARVALHO, Sávio Matheus Reis DeRESUMO: A ultrassonografia bidimensional com Doppler possibilita a avaliação de índices vasculares do fluxo sanguíneo na avaliação gestacional, bem como permite a caracterização hemodinâmica por meio da determinação de valores de resistência vascular, como o índice de resistividade (IR) e índice de pulsatilidade (IP), obtidos pela mensuração da velocidade de pico sistólica (VPS) e da velocidade diastólica final (VDF). O estudo visa definir valores hemodinamicamente normais da artéria umbilical (cordão umbilical- CU), artéria uteroplacentária (AUP), artéria média cerebral (ACM) e artéria carótida comum (ACC) dos fetos, de cadelas no terço final de gestação, bem como correlaciona-los entre si, para predizer indiretamente a viabilidade fetal e data provável do parto. Foram avaliadas 30 cadelas no terço final da gestação (40 - 60 dias), clinicamente saudáveis. Estas foram submetidas a avaliação ultrassonográfica dopplervelocimétrica em dois períodos, o primeiro, entre 40-50 dias e o segundo, entre 51-60 dias de gestação. Em cada período foi analisado os índices de pulsatilidade e resistividade da CU, AUP, ACM e a ACC fetos. Todos os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao Teste de Tukey, utilizando o P valor de 5%. As velocidades de pico sistólico (VPS) e a velocidade diastólica final (VDF) demonstraram aumento progressivo ao longo do tempo de estudo. Consequentemente, a relação S/D apresentou diminuição entre os períodos estudados. A análise dos índices de resistividade (IR) e pulsatilidade (IP) do CU, demonstraram diminuição entre os períodos 1 e 2. Semelhante, na AUP, os valores de VPS e VDF evidenciaram aumento entre tempos, enquanto a relação S/D diminuiu. Para a ACM e artéria carótida interna, os valores de VPS e VDF apresentaram-se crescentes até o final da gestação. A análise da relação cerebroplacentária (ACM/AU) demonstrou valores decrescentes entre os períodos P1 e P2, demonstrando diferença estatística significante (P < 0,05). As velocidades de fluxo vascular da AUP, CU, ACM e ACC mostraram valores semelhantes aos previamente descritos na literatura para cadelas em curso normal de gestação. Os dados obtidos no presente estudo podem ser úteis na identificação da centralização fetal, contribuindo na caracterização da viabilidade fetal, fornecendo dados valiosos para a programação mais efetiva do parto por cesariana, aumentando a sobrevida dos recém-nascidos. ABSTRACT: Two-dimensional Doppler ultrasound enables the assessment of vascular blood flow indices in the gestational assessment, as well as allows for hemodynamic characterization by determining vascular resistance values, such as the resistivity index (RI) and pulsatility index (PI), obtained by measuring the peak systolic velocity (PSV) and the end-diastolic velocity (EDV). The study aims to assume hemodynamically normal values of the umbilical artery (umbilical cord-UC), uteroplacental artery, middle cerebral artery (MCA) and carotid artery of fetuses, of bitches in the final third of pregnancy, as well as correlating them with each other to predict indirectly the fetal viability and probable date of delivery. Thirty female dogs in the final third of pregnancy (40 - 60 days), clinically healthy, were evaluated. These patients were submitted to Doppler velocimetric ultrasonographic evaluation in two periods, the first, between 40-50 days and the second, between 51-60 days of gestation. In each phase, the indices of pulsatility and resistivity of the UC, uteroplacental artery, MCA and common carotid artery of the fetuses were analyzed. All data obtained were submitted to analysis of variance and the Tukey test, using a P value of 5%. Systolic velocities peak (SVP) and end-diastolic velocity (EDV) showed a progressive increase over the study period. Consequently, the S/D ratio decreased between the periods studied. The analysis of the umbilical cord resistivity (RI) and pulsatility (PI) indices showed an decrease from period 1 to period 2. Similarly, in the uteroplacentalal artery, the PSV and EDV values showed an increase between times, while the S/D ratio decreased. For the MCA and internal carotid artery, the PSV and VDF values increased until the end of pregnancy. The analysis of the cerebroplacental relationship (MCA/UA) showed decreasing values between periods P1 and P2, demonstrating a statistically significant difference (P < 0.05). The vascular flow velocities of the uteroplacental artery, UC, MCA and internal carotid artery showed values similar to those previously described in the literature for female dogs in the normal course of pregnancy. The data obtained in this study can be useful in identifying fetal centralization, contributing to the characterization of fetal viability, providing valuable data for a more effective scheduling of cesarean delivery, increasing the survival of newborns.Item LÍQUIDO DA CASCA DA CASTANHA DO CAJU (Anarcadium occidentale L.) (LCC) E SEUS PRINCIPAIS CONSTITUINTES: atividades anti-leishmania, toxicológica e imunomoduladora(2022-10-26) RIBEIRO, Iuliana Marjory MartinsRESUMO: As leishmanioses são doenças negligenciadas endêmicas em 98 países, constituindo um grande problema de saúde pública devido à sua alta incidência e letalidade. Estima-se que ocorram entre 700.000 a 1 milhão de novos casos de leishmaniose cutânea e 50.000 a 90.000 novos casos de leishmaniose visceral em todo o mundo a cada ano. Tem como agente etiológico mais de 20 espécies do gênero Leishmania, transmitidas por espécies diferentes de flebotomíneos dos gêneros Lutzomyia e Phlebotomus. Os tratamentos convencionais causam efeitos adversos graves, baixa tolerância, desenvolvimento de cepas resistentes, além de serem onerosos. Nesse contexto, os produtos naturais têm sido investigados na busca por novas alternativas terapêuticas. O líquido da casca da castanha do caju (LCC), um dos principais subprodutos do cajueiro, é uma fonte natural de compostos fenólicos, como ácido anacárdico (AA), cardanol (CN) e cardol (CD), e apresenta atividades antioxidantes, antiinflamatórias, antimicrobianas, antitumorais, larvicidas e inseticidas. Seus derivados também são amplamente explorados isoladamente, principalmente quanto às suas propriedades como antibacterianas, antioxidantes, antifúngicas, antitumorais, entre outras. O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades anti-Leishmania, citotóxica e imunomoduladora do LCC, AA, CN e CD. Para tanto, foram realizados protocolos de atividade anti-Leishmania sobre formas promastigotas de L. infantum, L. braziliensis e L. major, citotoxicidade sobre macrófagos murinos, bem como avaliação de macrófagos infectados com L. infantum. Ainda foram realizados ensaios de imunomodulação como atividade lisossomal, capacidade fagocítica e avaliação da indução na produção de óxido nítrico em macrófagos, bem como avaliação da toxicidade aguda sobre Tenebrio molitor. As substâncias testadas demonstraram potencial anti-Leishmania, e os valores de concentração inibitória média (CI50) do LCC, AA, CN e CD contra L. infantum foram: 148,12; 106,45; 56,74 e 154,32 μg/mL, contra L. braziliensis foram: 85,71; 50,83; 64,28 e 137,05 μg/mL, e contra L. major foram: 153,56; >800; 122,31 e 112,50 μg/mL, respectivamente. Na ação sobre os macrófagos, as concentrações médias de citotoxicidade (CC50) do LCC, AA, CN e CD foram 37,51;12,59; 31,44 e 40,53 μg/mL, respectivamente. Na avaliação do LCC e CN contra formas amastigotas intracelulares, houve uma redução significativa no percentual de macrófagos infectados e no índice de sobrevivência das formas amastigotas internalizadas, com índice de seletividade (IS) significativo para ambas as substâncias, apresentando CI50 de 4,63 e 1,42 μg/ml, respectivamente. LCC, AA, CN e CD apresentaram atividade imunomoduladora, atuando sobre parâmetros de ativação de macrófagos, demonstrado pelo aumento de sua capacidade fagocítica e volume lisossomal, contudo não exibiram indução significativa da síntese de NO. Quanto à toxicidade aguda, as taxas de sobrevivência das larvas de T. molitor foram: 85%, 75% e 60% em contato com LCC e 85%, 60% e 40% em contato com CN, ambas as substâncias nas doses de 3; 30 e 300 mg/Kg. Houve diferença significativa entre as curvas de sobrevivência das larvas em contato com CN, demonstrando-se toxicidade aguda significante para esta substância. Os resultados deste estudo são promissores e servem como ponto de partida para a realização de pesquisas posteriores que visem a avaliação do potencial leishmanicida in vivo. ABSTRACT: Leishmaniasis is a neglected endemic disease in 98 countries, constituting a major public health problem due to its high incidence and lethality. It is estimated that between 700,000 to 1 million new cases of cutaneous leishmaniasis and 50,000 to 90,000 new cases of visceral leishmaniasis occur worldwide each year. Its etiological agent is more than 20 species of the genus Leishmania, transmitted by different species of sandflies of the genus Lutzomyia and Phlebotomus. Conventional treatments cause serious adverse effects, low tolerance, development of resistant strains, in addition to being costly. In this context, natural products have been investigated in the search for new therapeutic alternatives. Cashew nut shell liquid (CNSL), one of the main cashew by-products, is a natural source of phenolic compounds such as anacardic acid (AA), cardanol (CN) and cardol (CD), and has antioxidant, anti-inflammatory activities, antimicrobials, antitumors, larvicides and insecticides. Its derivatives are also widely explored in isolation, mainly regarding their properties as antibacterial, antioxidant, antifungal, antitumor, among others. The aim of this study was to evaluate the anti-Leishmania, cytotoxic and immunomodulatory activities of CNSL, AA, CN and CD. For that, protocols of anti-Leishmania activity were carried out on promastigote forms of L. infantum, L. braziliensis and L. major, cytotoxicity on murine macrophages, as well as evaluation of macrophages infected with L. infantum. Immunomodulation assays such as lysosomal activity, phagocytic capacity and evaluation of the induction of nitric oxide production in macrophages, as well as evaluation of acute toxicity on Tenebrio molitor, were also carried out. The tested substances showed anti-Leishmania potential, and the mean inhibitory concentration (IC50) values of CNSL, AA, CN and CD against L. infantum were: 148.12; 106.45; 56.74 and 154.32 μg / mL, against L. braziliensis were: 85.71; 50.83; 64.28 and 137.05 μg / mL, and against L. major were: 153.56; >800; 122.31 and 112.50 μg/ml, respectively. In the action on macrophages, the mean concentrations of cytotoxicity (CC50) of CNSL, AA, CN and CD were 37.51;12.59; 31.44 and 40.53 μg/ml, respectively. In the evaluation of LCC and CN against intracellular amastigotes, there was a significant reduction in the percentage of infected macrophages and in the survival rate of internalized amastigotes, with a significant selectivity index (SI) for both substances, with an IC50 of 4.63 and 1.42 μg/ml, respectively. CNSL, AA, CN and CD showed immunomodulatory activity, acting on macrophage activation parameters, demonstrated by the increase in their phagocytic capacity and lysosomal volume, however they did not exhibit significant induction of NO synthesis. As for acute toxicity, the survival rates of T. molitor larvae were: 85%, 75% and 60% in contact with LCC and 85%, 60% and 40% in contact with CN, both substances at doses of 3; 30 and 300 mg/kg. The results of this study are promising and serve as starting points for further research aimed at evaluating the potential leishmanicidal in vivo.Item ECOCARDIOGRAFIA NA COMPARAÇÃO DO PERFIL HEMODINÂMICO DA VIA DE SAÍDA DO VENTRÍCULO ESQUERDO NAS JANELAS APICAL E SUBXIFÓIDE EM CANINOS HÍGIDOS(2022-06-20) MARQUES, Danielle ClimacoRESUMO: A mensuração do fluxo da via de saída do ventrículo esquerdo (VSVE) é um dos parâmetros adquiridos em um exame ecocardiográfico de rotina. Por ele é possível adquirir outros parâmetros de importância para a avaliação clínica do paciente como o volume sistólico e o débito cardíaco. No entanto, o estudo da variabilidade dos valores hemodinâmicos da VSVE e as suas variáveis referentes aos métodos de aquisição ecocardiográfica transtorácica ainda não estão bem estabelecidos na medicina veterinária. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo ecocardiográfico para a comparação da integral velocidade-tempo (VTI), volume sistólico (SV) e débito cardíaco (DC), derivados das janelas apical cinco câmaras e subxifóide em caninos hígidos. No estudo foram examinados 10 cães clinicamente sadios, não sedados contidos fisicamente. Após o exame ecocardiográfico completo, o diâmetro interno da via de saída do ventrículo esquerdo (DVSVE) foi mensurado na janela paraesternal no eixo longo ao nível do anel da valva aórtica durante a sístole. A área transversa da VSVE foi calculada utilizando a fórmula πr 2. A VTI da VSVE foi mensurada pelo Doppler pulsado antes da válvula aórtica na janela apical cinco câmaras e subxifóide. O SV foi resultado do produto das medidas do VTI da VSVE e área transversa da VSVE. O débito cardíaco foi estimado pelo produto do SV e frequência cardíaca. VTI, SV e DC foram comparáveis entre os dois grupos e mostrou uma diferença estatística significativa (P <0,05). O DC médio na janela apical 5C foi de 2,22±1,29 L/min, enquanto o obtido pela janela subxifóide foi de 2,60±1,49 L/min. O SV médio encontrado na janela apical 5C foi de 19,56±12,27 mL, enquanto o obtido na janela subxifóide foi de 22,82±14,21 mL. O VTI médio encontrado na apical 5C foi de 13,97±2,78 cm, enquanto na subxifóide foi de 16,34±3,30 cm. O reconhecimento dessas variabilidades e diferenças metodológicas de aquisições de dados são necessários para o entendimento, classificação e terapia ou auxílio terapêutico mais eficazes no âmbito clínico.-----------ABSTRACT: Measurement of left ventricular outflow tract (LVOT) flow is one of the parameters acquired in a routine echocardiographic examination. Through it, it is possible to acquire other important parameters for the clinical evaluation of the patient, such as systolic volume and cardiac output. However, the study of the variability of LVOT hemodynamic values and its variables related to the transthoracic echocardiographic acquisition methods are still not well established in veterinary medicine. The objective of this work was to perform an echocardiographic study to compare the velocity-time integral (VTI), stroke volume (SV) and cardiac output (CO), derived from the apical five-chamber and subxiphoid windows in healthy canines. In the study, 10 physically restrained, non-sedated, clinically healthy dogs were examined. After the complete echocardiographic examination, the left ventricular outflow tract (LVLVD) internal diameter was measured in the parasternal window on the long axis at the level of the aortic valve annulus during systole. The LVOT cross-sectional area was calculated using the formula πr 2. The LVOT IVT was measured by pulsed Doppler before the aortic valve in the five-chamber apical and subxiphoid window. The VS was the result of the product of the measurements of the VTI of the LVOT and the cross-sectional area of the LVOT. Cardiac output was estimated by the product of SV and heart rate. VTI, SV and DC were comparable between the two groups and showed a statistically significant difference (P < 0.05). The mean CO in the 5C apical window was 2.22±1.29 L/min, while that obtained through the subxiphoid window was 2.60±1.49 L/min. The mean SV found in the 5C apical window was 19.56±12.27 mL, while that obtained in the subxiphoid window was 22.82±14.21 mL. The mean VTI found in the 5C apical was 13.97±2.78 cm, while in the subxiphoid it was 16.34±3.30 cm. Recognition of these variability and methodological differences in data acquisitions is necessary for understanding, classifying and more effective therapy or therapeutic aid in the clinical setting.Item MODELAGEM DE DADOS DE LEISHMANIOSE VISCERAL NA CIDADE DE TERESINA E GERENCIAMENTO DE PROCESSOS NA TOMADA DE DECISÃO EM GESTÃO PÚBLICA.(2022-06-20) FERREIRA, Everaldo AraújoRESUMO: Essa pesquisa mensura a complexidade das doenças conhecidas como Leishmanioses e propõe a criação de um Modelo Dinâmico baseado nas Regras de Fuzzy, que descreve o comportamento da doença considerando indicadores estatísticos pesquisados nos últimos 15 anos. A Modelagem deverá subsidiar os processos gerenciais de tomada de decisão na Gestão Pública o que contribuirá para o controle ou minimização de um surto epidemiológico. A doença pode manifestar-se como leishmaniose visceral (também conhecida como calazar), leishmaniose cutânea e leishmaniose mucocutânea, sendo todas elas causadas por espécies de protozoário intracelular obrigatório do gênero Leishmania. A necessidade de se estudar o comportamento dinâmico de epidemias e endemias em populações no geral é de fundamental importância no que diz respeito à evolução, estabilidade e eventual controle das doenças. Porém, como boa parte dos fenômenos naturais, os fenômenos biológicos possuem uma carga grande de subjetividade que não são usualmente incorporadas nos tradicionais modelos de diagnósticos que os descrevem. Na última década, a literatura que trata de fenômenos incertos tem crescido consideravelmente, principalmente no tocante da teoria de controle automático segundo Zadeh (1965). Nosso principal interesse nesse trabalho está relacionado com o estudo e identificação de fenômenos biológicos ligados ao contágio do calazar que exibem graus de incertezas e que possam ser modelados pelas Bases de Regra Fuzzy. Acreditamos que tal ferramenta pode acrescentar informações ''novas '' no estudo de certas situações reais complexas, como por exemplo, em diagnósticos médicos, em epidemiologia, e em sistemas de interação de espécies, ecologia, onde tem-se apenas informações parciais ou imprecisas. Considerando cenário multifacetado, dentro de um contexto social urbano diverso no papel primordial de coleta, consolidação, avaliação e disseminação de informações para subsidiar a tomada de decisão, exigindo constantes inovações, sobretudo na forma de articular as diversas realidades contidas nas conjunturas das vigilâncias locais, a identificação de áreas críticas para doenças infecciosas e parasitárias no Brasil e o conhecimento sobre a sua relação com indicadores socioeconômicos são de fundamental importância para alinhar as ações de vigilância nos âmbitos local e nacional, fornecendo subsídios para o estabelecimento de medidas assertivas de controle, planejamento e intervenção, bem como para articular ações intersetoriais de mitigação das causas determinantes desses adoecimentos.----------ABSTRACT: This research measures the complexity of the diseases known as Leishmaniasis and the creation of a Dynamic Model based on Fuzzy's Rules, which describes the behavior of the disease considering statistical indicators researched in the last 15 years. Modeling should support managerial decision-making processes in Public Management, which will certainly contribute to the control or minimization of an epidemiological outbreak person. The disease can manifest as visceral leishmaniasis (VL; also known as kala-azar), cutaneous leishmaniasis, and mucocutaneous leishmaniasis, all of these forms are caused by obligate intracellular protozoan species of the genus Leishmania. The need to study the dynamic behavior of epidemics and endemics in populations in general is of fundamental importance with regard to the evolution, stability and eventual control of diseases. However, like most natural phenomena, biological phenomena have a large load of subjectivity that is not usually incorporated in the traditional diagnostic models that describe them. In the last decade, the literature dealing with uncertain phenomena has grown considerably, especially with regard to the automatic control theory according to Zadeh (1965). Our main interest here is related to the study and identification of biological phenomena linked to kala azar contagion that exhibit degrees of uncertainty and that can be modeled by Fuzzy Rule Bases. We believe that such a tool can add ''new'' information in the study of certain complex real situations, such as in medical diagnoses, in epidemiology, and in species interaction systems, ecology, where only partial or imprecise information is available. Considering a multifaceted scenario, within a diverse urban social context in the primary role of collecting, consolidating, evaluating and disseminating information to support decision-making, requiring constant innovations, especially in the way of articulating the various realities contained in the conjunctures of local surveillance, the identification of critical areas for infectious and parasitic diseases in Brazil and knowledge about their relationship with socioeconomic indicators are of fundamental importance to align surveillance actions at the local and national levels, providing subsidies for the establishment of assertive control and planning measures and intervention, as well as to articulate intersectorial actions to mitigate the determinant causes of these illnesses.Item AVALIAÇÃO DOS VALORES HEMODINÂMICOS PRESUMIDAMENTE NORMAIS DA ARTÉRIA UMBILICAL, ARTÉRIA CARÓTIDA INTERNA E ARTÉRIA CEREBRAL MÉDIA FETAL NO TERÇO FINAL GESTACIONAL EM CADELAS(2022-05-16) RUFINO, Andressa Kelly BarbosaRESUMO: A ultrassonografia bidimensional com Doppler possibilita a avaliação de índices vasculares do fluxo sanguíneo na avaliação gestacional, bem como permite a caracterização hemodinâmica por meio da determinação de valores de resistência vascular, como o índice de resistividade (IR) e índice de pulsatilidade (IP), obtidos pela mensuração da velocidade de pico sistólica (VPS) e da velocidade diastólica final (VDF). O estudo visa definir valores hemodinamicamente normais da artéria umbilical (cordão umbilical- CU), artéria uteroplacentária (AUP), artéria média cerebral (ACM) e artéria carótida comum (ACC) dos fetos, de cadelas no terço final de gestação, bem como correlaciona-los entre si, para predizer indiretamente a viabilidade fetal e data provável do parto. Foram avaliadas 30 cadelas no terço final da gestação (40 - 60 dias), clinicamente saudáveis. Estas foram submetidas a avaliação ultrassonográfica dopplervelocimétrica em dois períodos, o primeiro, entre 40-50 dias e o segundo, entre 51-60 dias de gestação. Em cada período foi analisado os índices de pulsatilidade e resistividade da CU, AUP, ACM e a ACC fetos. Todos os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao Teste de Tukey, utilizando o P valor de 5%. As velocidades de pico sistólico (VPS) e a velocidade diastólica final (VDF) demonstraram aumento progressivo ao longo do tempo de estudo. Consequentemente, a relação S/D apresentou diminuição entre os períodos estudados. A análise dos índices de resistividade (IR) e pulsatilidade (IP) do CU, demonstraram diminuição entre os períodos 1 e 2. Semelhante, na AUP, os valores de VPS e VDF evidenciaram aumento entre tempos, enquanto a relação S/D diminuiu. Para a ACM e artéria carótida interna, os valores de VPS e VDF apresentaram-se crescentes até o final da gestação. A análise da relação cerebroplacentária (ACM/AU) demonstrou valores decrescentes entre os períodos P1 e P2, demonstrando diferença estatística significante (P < 0,05). As velocidades de fluxo vascular da AUP, CU, ACM e ACC mostraram valores semelhantes aos previamente descritos na literatura para cadelas em curso normal de gestação. Os dados obtidos no presente estudo podem ser úteis na identificação da centralização fetal, contribuindo na caracterização da viabilidade fetal, fornecendo dados valiosos para a programação mais efetiva do parto por cesariana, aumentando a sobrevida dos recém-nascidos. ABSTRACT: Two-dimensional Doppler ultrasound enables the assessment of vascular blood flow indices in the gestational assessment, as well as allows for hemodynamic characterization by determining vascular resistance values, such as the resistivity index (RI) and pulsatility index (PI), obtained by measuring the peak systolic velocity (PSV) and the end-diastolic velocity (EDV). The study aims to assume hemodynamically normal values of the umbilical artery (umbilical cord-UC), uteroplacental artery, middle cerebral artery (MCA) and carotid artery of fetuses, of bitches in the final third of pregnancy, as well as correlating them with each other to predict indirectly the fetal viability and probable date of delivery. Thirty female dogs in the final third of pregnancy (40 - 60 days), clinically healthy, were evaluated. These patients were submitted to Doppler velocimetric ultrasonographic evaluation in two periods, the first, between 40-50 days and the second, between 51-60 days of gestation. In each phase, the indices of pulsatility and resistivity of the UC, uteroplacental artery, MCA and common carotid artery of the fetuses were analyzed. All data obtained were submitted to analysis of variance and the Tukey test, using a P value of 5%. Systolic velocities peak (SVP) and end-diastolic velocity (EDV) showed a progressive increase over the study period. Consequently, the S/D ratio decreased between the periods studied. The analysis of the umbilical cord resistivity (RI) and pulsatility (PI) indices showed an decrease from period 1 to period 2. Similarly, in the uteroplacentalal artery, the PSV and EDV values showed an increase between times, while the S/D ratio decreased. For the MCA and internal carotid artery, the PSV and VDF values increased until the end of pregnancy. The analysis of the cerebroplacental relationship (MCA/UA) showed decreasing values between periods P1 and P2, demonstrating a statistically significant difference (P < 0.05). The vascular flow velocities of the uteroplacental artery, UC, MCA and internal carotid artery showed values similar to those previously described in the literature for female dogs in the normal course of pregnancy. The data obtained in this study can be useful in identifying fetal centralization, contributing to the characterization of fetal viability, providing valuable data for a more effective scheduling of cesarean delivery, increasing the survival of newborns.